主要設備

試劑

(1) 包被緩沖液（pH9.60.05M 碳酸鹽緩沖液）：

Na2CO3 1.59g

碳酸氫鈉 2.93g

加入蒸餾水至 1000ml

（2）洗滌緩沖液（PH7.4PBS）：0.15M

K2PO4 0.2g

Na2HPO4 12H2O 2.9g

氯化鈉 8.0g 0.2g

Tween-20 0.05% 0.5ml

加入蒸餾水至 1000ml

(3) 稀釋劑：

牛血清白蛋白 (BSA) 0.1 克

加入洗滌緩沖液至 100ml

或用山羊血清、兔血清等血清和洗滌液補足5-10%。

(4) 終止液（3M H2SO4）：

滴加蒸餾水178.3ml、濃硫酸（98%）21.7ml。

(5)底物緩沖液(PH5.0磷酸棗檸檬酸)：

0.2MNa2HPO4 (28.4g/L) 25.7ml

0.1M檸檬酸（19.2g/L）24.3ml

加入 50ml 蒸餾水。

(6)TMB(四甲基聯苯胺)溶液：

TMB（10mg/5ml 無水乙醇）0.5ml

底物緩沖液 (PH5.5) 10ml

0.7%H2O2 32μl

(7 ABTS使用液：

ABTS 0.5mg

底物緩沖液 (PH5.5) 1ml

3%H2O2 2μl

(8)抗原、抗體和酶標抗體。

(9)正常人血清和陽性對照血清。

利用

ELISA的基礎是抗原或抗體的固定化和抗原或抗體的酶標記。固相載體表面結合的抗原或抗體仍保留其免疫活性，而酶標抗原或抗體同時保留其免疫活性和酶活性。在測量過程中，測試樣品（其中的抗體或抗原）與固體支持物表面的抗原或抗體發(fā)生反應。在固相載體上形成的抗原抗體復合物通過洗滌與液體中的其他物質分離。然后加入酶標抗原或抗體，也通過反應與固相載體結合。此時，固相上酶的量與樣品中被測物質的量成正比。加入酶反應的底物后，底物被酶催化成有色產物，產物的多少與樣品中被測物質的多少直接相關，因此可以進行定性或定量分析根據顏色深度。由于酶的高催化效率，間接放大了免疫反應的結果，并且該測定方法達到了高靈敏度。 ELISA 可用于測量抗原和抗體。

組成結構

1. 血清：手術過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。采血后，通過以 1000 x g 離心 10 分鐘快速小心地分離紅細胞。

2、血漿：EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。通過以 1000 x g 離心 30 分鐘去除顆粒。

3. 細胞上清液：1000×g 離心 10 分鐘以去除顆粒和聚集物。

4、組織勻漿：加入適量生理鹽水搗碎組織。 1000 × g 離心 10 分鐘，取上清液。

5、儲存：樣品如不立即使用，應分成小份儲存于-70℃，避免反復冷凍。盡量不要使用溶血或高脂血癥。如果血清中含有大量顆粒，請在測試前將其離心或過濾。不要在 37°C 或更高的溫度下解凍。在室溫下解凍并確保樣品均勻、充分地解凍。

該IBL試劑盒可用于小鼠血清、EDTA血漿和細胞上清液中白細胞介素6的定量檢測

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